1、如何选用培养基？
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件：
| 细胞系 | 细胞类型 | 种 | 组织 | 推荐使用的培养基 |
|---|---|---|---|---|
| 293 | 成纤维细胞 | 人 | 胚胎肾 | MEM，10% 热灭活马血清 |
| 3T6 | 成纤维细胞 | 小鼠 | 胚胎 | DMEM, 10% 胎牛血清 |
| A549 | 上皮细胞 | 人 | 肺癌 | F-12K, 10%胎牛血清 |
| A9 | 成纤维细胞 | 小鼠 | 结缔组织 | DMEM, 10% 胎牛血清 |
| AtT-20 | 上皮细胞 | 小鼠 | 垂体肿瘤 | F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清 |
| BALB/3T3 | 成纤维细胞 | 小鼠 | 胚胎 | DMEM, 10% 胎牛血清 |
| BHK-21 | 成纤维细胞 | 仓鼠 | 肾 | GMEM, 10% 胎牛血清 或MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA |
| BHL-100 | 上皮细胞 | 人 | 乳房 | McCoy'5A, 10% 胎牛血清 |
| BT | 成纤维细胞 | 牛 | 鼻甲骨细胞 | MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA |
| Caco-2 | 上皮细胞 | 人 | 结肠腺癌 | MEM, 20% 胎牛血清 和NEAA |
| Chang | 上皮细胞 | 人 | 肝脏 | BME, 10% 小牛血清 |
| CHO-K1 | 上皮细胞 | 仓鼠 | 卵巢 | F-12, 10% 胎牛血清 |
| Clone 9 | 上皮细胞 | 大鼠 | 肝脏 | F-12K, 10% 胎牛血清 |
| Clone M-3 | 上皮细胞 | 小鼠 | 黑素瘤 | F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 |
| COS-1 | 成纤维细胞 | 猴 | 肾 | DMEM, 10% 胎牛血清 |
| COS-3 | 成纤维细胞 | 猴 | 肾 | DMEM, 10% 胎牛血清 |
| COS-7 | 成纤维细胞 | 猴 | 肾 | DMEM, 10% 胎牛血清 |
| CRFK | 上皮细胞 | 猫 | 肾 | MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA |
| CV-1 | 成纤维细胞 | 猴 | 肾 | MEM, 10% 胎牛血清 |
| D-17 | 上皮细胞 | 狗 | 骨肉瘤 | MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA |
| Daudi | 成淋巴细胞 | 人 | 淋巴瘤病人血液 | RPMI-1640, 10% 胎牛血清 |
| GH1 | 上皮细胞 | 大鼠 | 垂体肿瘤 | F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 |
| GH3 | 上皮细胞 | 大鼠 | 垂体肿瘤 | F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 |
| H9 | 成淋巴细胞 | 人 | T细胞淋巴瘤 | RPMI-1640, 20% 胎牛血清 |
| HaK | 上皮细胞 | 仓鼠 | 肾 | BME, 10% 小牛血清 |
| HCT-15 | 上皮细胞 | 人 | 结肠直肠腺癌 | RPMI-1640, 10% 胎牛血清 |
| HeLa | 上皮细胞 | 人 | 子宫颈癌 | MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA (in suspension, S-MEM) |
| HEp-2 | 上皮细胞 | 人 | 喉 癌 | MEM, 10% 胎牛血清 |
| HL-60 | 成淋巴细胞 | 人 | 早幼粒细胞白血病 | RPMI-1640, 20% 胎牛血清 |
| HT-1080 | 上皮细胞 | 人 | 纤维肉瘤 | MEM, 10% HI 胎牛血清 和NEAA |
| HT-29 | 上皮细胞 | 人 | 结肠腺癌 | McCoy's 5A, 10% 胎牛血清 |
| HUVEC | 内皮细胞 | 人 | 脐带 | F-12K, 10% 胎牛血清 和 肝素盐 100 ug/ ml |
| I-10 | 上皮细胞 | 小鼠 | 睾丸癌 | F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 |
| IM-9 | 成淋巴细胞 | 人 | 骨髓瘤病人骨髓 | RPMI-1640, 10% 胎牛血清 |
| JEG-2 | 上皮细胞 | 人 | 绒毛膜癌 | MEM, 10% 胎牛血清 |
| Jensen | 成纤维细胞 | 大鼠 | 肉瘤 | McCoy's 5A, 5% 胎牛血清 |
| Jurkat | 成淋巴细胞 | 人 | 淋巴瘤 | RPMI-1640, 10% 胎牛血清 |
| K-562 | 成淋巴细胞 | 人 | 骨髓性的白血病 | RPMI-1640, 10% 胎牛血清 |
| KB | 上皮细胞 | 人 | 口腔癌 | MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA |
| KG-1 | 骨髓白细胞 | 人 | 红白血病病人骨髓 | IMDM, 20% 胎牛血清 |
| L2 | 上皮细胞 | 大鼠 | 肺 | F-12K, 10%胎牛血清 |
| L6 | 大鼠 | 骨骼肌成肌细胞 | DMEM, 10% 胎牛血清 | |
| LLC-WRC 256 | 上皮细胞 | 大鼠 | 癌 | Medium 199, 5% 马血清 |
| McCoy | 成纤维细胞 | 小鼠 | 未知 | MEM, 10% 胎牛血清 |
| MCF7 | 上皮细胞 | 人 | 乳腺癌 | MEM, 10% 胎牛血清 NEAA, 10ug/ml 胰岛素 |
| WEHI-3b | 类巨噬细胞 | 小鼠 | 骨髓单核细胞白血病 | DMEM, 10% 胎牛血清 |
| WI-38 | 上皮细胞 | 人 | 胚胎肺 | BME, 10% 胎牛血清 |
| WISH | 上皮细胞 | 人 | 羊膜 | BME, 10% 胎牛血清 |
| WS1 | 人 | 胚胎皮肤 | MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA | |
| XC | 上皮细胞 | 大鼠 | 肉瘤 | MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA |
| Y-1 | 上皮细胞 | 小鼠 | 肾上腺瘤 | F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 |
2、为什么要热灭活血清？
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
3、L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
4、GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？
GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的α－氨基用L－丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L－谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。
5、为什么培养基中可以省去加酚红？
酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。
6、如何用台盼兰计数活细胞？
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。
7、如何消除组织培养的污染？
当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
① 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。
② 分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
③ 每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。
④ 确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2－3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2－3代。
⑤ 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
⑥ 重复步骤4。
⑦ 在无抗生素的培养基中培养4－6代，确定污染是否以已被消除。
8、培养基中丙酮酸钠的作用是什么？
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
9、为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？
GIBICO的胎牛血清 没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在－20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。
10、目录上说，Hank’s 平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？
Hank’s 平衡盐溶液（HBS）和Earle’s平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能差别？
HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，碳酸氢钠的含量在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2 培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。
